• Реклама

  • Реклама


  • Новости сайта
  • Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 30.11.2007 N 80 "О НАДЗОРЕ ЗА ОБОРОТОМ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ГМО" (вместе с "МЕТОДИЧЕСКИМИ УКАЗАНИЯМИ МУ 2.3.2.2306-07 "МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ", "МЕТОДИЧЕСКИМИ УКАЗАНИЯМИ МУК 4.2.2304-07 "МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ. ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИЩЕВЫЕ ДОБАВКИ. МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ", "МЕТОДИЧЕСКИМИ УКАЗАНИЯМИ МУК 4.2.2305-0...

    Страница 11


    Страницы: | Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 | Стр.4 | Стр.5 | Стр.6 | Стр.7 | Стр.8 | Стр.9 | Стр.10 | Стр.11 | Стр.12 | Стр.13 | Стр.14 | Стр.15 |


    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦MgCl2 раствор (50 млМ)              ¦ 4,00                               ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Taq-полимераза (5 единиц/мкл)       ¦ 0,25                               ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Итого:                              ¦25,00                               ¦
    L------------------------------------+-------------------------------------

    - условия амплификации:

    -----------------------------------+--------------------------------------¬
    ¦              Стадия              ¦        Программа амплификации        ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Доамплификационный период         ¦2 мин./50 °C                          ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Денатурация первичная             ¦10 мин./95 °C                         ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Амплификация                      ¦                                      ¦
    ¦Денатурация                       ¦15 сек./95 °C                         ¦
    ¦Отжиг                             ¦60 сек./60 °C измерение               ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Количество циклов амплификации    ¦45                                    ¦
    L----------------------------------+---------------------------------------

    8.11. Метод количественного определения кукурузы линии GA 21:

    - основан на ПЦР в реальном времени с определением гена, кодирующего синтез алкогольдегидрогеназы 1 (adhl 1), присущей для всех линий кукурузы и области ДНК, специфичной трансформационному событию GA 21, на границе генома кукурузы и элемента генетической конструкции;

    - используются зонды, меченные красителем FAM;

    - для построения калибровочной прямой используются стандартные образцы состава генетически модифицированной кукурузы: 0,1%, 0,49%, 0,98%, 1,3%, 1,71%, 4,26%;

    - праймеры на ген adhl 1:

    1) 5' CCA GCC TCA TGG CCA AAG 3';

    2) 5' CCT TCT TGG CGG CTT ATC TG 3';

    3) 5'-FAM-CTT AGG GGC AGA CTC CCG TGT TCC CT-TAMRA-3';

    длина ампликона 70 пар нуклеотидов;

    - праймеры на целевую последовательность ГМО:

    4) 5' CTT ATC GTT ATG CTA TTT GCA ACT TTA GA 3';

    5) 5' TGG CTC GCG ATC CTC CT 3';

    6) 5'-FAM-CAT ATA CTA ACT CAT ATC TCT TTC TCA ACA GCA GGT GGG T-TAMRA-3';

    длина ампликона 112 пар нуклеотидов;

    - реакционная смесь для проведения ПЦР, количественное определение ДНК кукурузы:

    -------------------------------------+------------------------------------¬
    ¦              Реактивы              ¦            Объем, мкл              ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Раствор целевой ДНК (максимальное   ¦ 5,00                               ¦
    ¦количество ДНК 300 нг)              ¦                                    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Taq-полимераза (5 единиц/мкл)       ¦ 0,25                               ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Буфер для ПЦР 10 X                  ¦ 5,00                               ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦                                    ¦Концентрация в реакционной смеси    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦MgCl2 раствор                       ¦ 5,00 ммоль/л                       ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймеры 1, 2                       ¦150,00 нмоль/л каждого              ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦dUTP                                ¦400,00 мкмоль/л                     ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Смесь нуклеотидов dATP, dCTP, dGTP  ¦200,00 мкмоль/л каждого             ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймер 3                           ¦ 50,00 нмоль/л                      ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Деионизированная вода               ¦довести до 50,00 мкл                ¦
    L------------------------------------+-------------------------------------

    - реакционная смесь для проведения ПЦР, количественное определение рекомбинантной ДНК:

    -------------------------------------+------------------------------------¬
    ¦              Реактивы              ¦            Объем, мкл              ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Раствор целевой ДНК (максимальное   ¦ 5,00                               ¦
    ¦количество ДНК 300 нг)              ¦                                    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Taq-полимераза (5 единиц/мкл)       ¦ 0,25                               ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Буфер для ПЦР 10 X                  ¦ 5,00                               ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦                                    ¦Концентрация в реакционной смеси    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦MgCl2 раствор                       ¦ 5,00 ммоль/л                       ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймеры 4, 5                       ¦150,00 нмоль/л каждого              ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦dUTP                                ¦400,00 мкмоль/л                     ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Смесь нуклеотидов dATP, dCTP, dGTP  ¦200,00 мкмоль/л каждого             ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймер 6                           ¦ 50,00 нмоль/л                      ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Деионизированная вода               ¦довести до 50,00 мкл                ¦
    L------------------------------------+-------------------------------------

    - условия амплификации:

    -----------------------------------+--------------------------------------¬
    ¦              Стадия              ¦        Программа амплификации        ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Доамплификационный период         ¦2 мин./50 °C                          ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Денатурация первичная             ¦10 мин./95 °C                         ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Амплификация                      ¦                                      ¦
    ¦Денатурация                       ¦15 сек./95 °C                         ¦
    ¦Отжиг                             ¦60 сек./60 °C измерение               ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Количество циклов амплификации    ¦45                                    ¦
    L----------------------------------+---------------------------------------

    8.12. Метод количественного определения кукурузы линии MIR 604:

    - основан на ПЦР в реальном времени с определением гена, кодирующего синтез алкогольдегидрогеназы 1 (adhl 1), присущей для всех линий кукурузы и области ДНК, специфичной трансформационному событию MIR 604, на границе генома кукурузы и элемента генетической конструкции;

    - используются зонды, меченные красителем FAM и VIC;

    - для построения калибровочной прямой используются стандартные образцы состава и свойств генетически модифицированной кукурузы: менее 0,09%, 0,1%, 0,98%, 9,85%;

    - праймеры на ген adhl 1:

    1) 5' CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC 3';

    2) 5' CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC 3';

    3) 5'-VIC-AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA-TAMRA-3';

    длина ампликона 136 пар нуклеотидов;

    - праймеры на целевую последовательность ГМО:

    4) 5' GCG CAC GCA ATT CAA CAG 3';

    5) 5' GGT CAT AAC GTG ACT CCC TTA ATT CT 3';

    6) 5'-FAM-AGG CGG GAA ACG ACA ATC TGA TCA TG-TAMRA-3';

    длина ампликона 76 пар нуклеотидов;

    - реакционная смесь для проведения ПЦР, количественное определение ДНК кукурузы:

    -------------------------------------+------------------------------------¬
    ¦              Реактивы              ¦            Объем, мкл              ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Раствор целевой ДНК (максимальное   ¦5,00                                ¦
    ¦количество ДНК 250 нг)              ¦                                    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Taq-полимераза (5 единиц/мкл)       ¦0,25                                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Буфер для ПЦР 10 X                  ¦5,00                                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦                                    ¦Концентрация в реакционной смеси    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦MgCl2 раствор                       ¦5,00 ммоль/л                        ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймеры 1, 2                       ¦300 нмоль/л каждого                 ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦dUTP                                ¦400 мкмоль/л                        ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Смесь нуклеотидов dATP, dCTP, dGTP  ¦200 мкмоль/л каждого                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймер 3                           ¦200 нмоль/л                         ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Деионизированная вода               ¦довести до 25,00 мкл                ¦
    L------------------------------------+-------------------------------------

    - реакционная смесь для проведения ПЦР, количественное определение рекомбинантной ДНК:

    -------------------------------------+------------------------------------¬
    ¦              Реактивы              ¦            Объем, мкл              ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Раствор целевой ДНК (максимальное   ¦5,00                                ¦
    ¦количество ДНК 200 нг)              ¦                                    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Taq-полимераза (5 единиц/мкл)       ¦0,25                                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Буфер для ПЦР 10 X                  ¦5,00                                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦                                    ¦Концентрация в реакционной смеси    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦MgCl2 раствор                       ¦5,00 ммоль/л                        ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймер 4                           ¦600 нмоль/л                         ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймер 5                           ¦300 нмоль/л                         ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦dUTP                                ¦400 мкмоль/л                        ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Смесь нуклеотидов dATP, dCTP, dGTP  ¦200 мкмоль/л каждого                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймер 6                           ¦200 нмоль/л                         ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Деионизированная вода               ¦довести до 25,00 мкл                ¦
    L------------------------------------+-------------------------------------

    - условия амплификации:

    -----------------------------------+--------------------------------------¬
    ¦              Стадия              ¦        Программа амплификации        ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Доамплификационный период         ¦2 мин./50 °C                          ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Денатурация первичная             ¦10 мин./95 °C                         ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Амплификация                      ¦                                      ¦
    ¦Денатурация                       ¦15 сек./95 °C                         ¦
    ¦Отжиг                             ¦60 сек./60 °C измерение               ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Количество циклов амплификации    ¦40                                    ¦
    L----------------------------------+---------------------------------------

    8.13. Метод количественного определения риса линии LL 62:

    - основан на ПЦР в реальном времени с определением гена, кодирующего синтез фосфолипазы Д (PLD), присущей для всех линий риса и области ДНК, специфичной трансформационному событию LL 62, на границе генома риса и элемента генетической конструкции;

    - используются зонды, меченные красителем FAМ;

    - для построения калибровочной прямой используются стандартные образцы состава генетически модифицированного риса: менее 0,09%, 0,45%, 0,9%, 1,8%, 3,6%;

    - праймеры на ген PLD;

    1) 5' TGG TGA GCG TTT TGC AGT CT 3';

    2) 5' CTG ATC CAC TAG CAG GAG GTC C 3';

    3) 5'-FAM-TGT TGT GCT GCC AAT GTG GCC TG-TAMRA-3';

    длина ампликона 64 пары нуклеотидов;

    - праймеры на целевую последовательность ГМО:

    4) 5' AGC TGG CGT AAT AGC GAA GAG G 3';

    5) 5' TGC TAA CGG GTG CAT CGT CTA 3';

    6) 5'-FAM-CGC ACC GAT TAT TTA TAC TTT TAG TCC ACC-TAMRA-3';

    длина ампликона 88 пар нуклеотидов;

    - реакционная смесь для проведения ПЦР, количественное определение ДНК риса:

    -------------------------------------+------------------------------------¬
    ¦              Реактивы              ¦            Объем, мкл              ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Раствор целевой ДНК (максимальное   ¦5,00                                ¦
    ¦количество ДНК 200 нг)              ¦                                    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Taq-полимераза (5 единиц/мкл)       ¦0,25                                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Буфер для ПЦР 10 X                  ¦5,00                                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦                                    ¦Концентрация в реакционной смеси    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦MgCl2 раствор                       ¦5 ммоль/л                           ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймеры 1, 2 (10 мкМ)              ¦200 нмоль/л каждого                 ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦dUTP                                ¦400 мкмоль/л                        ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Смесь нуклеотидов dATP, dCTP, dGTP  ¦200 мкмоль/л каждого                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймер 3 (10 мкМ)                  ¦200 нмоль/л                         ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Деионизированная вода               ¦довести до 25,00 мкл                ¦
    L------------------------------------+-------------------------------------

    - реакционная смесь для проведения ПЦР, количественное определение рекомбинантной ДНК:

    -------------------------------------+------------------------------------¬
    ¦              Реактивы              ¦            Объем, мкл              ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Раствор целевой ДНК (максимальное   ¦5,00                                ¦
    ¦количество ДНК 200 нг)              ¦                                    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Taq-полимераза (5 единиц/мкл)       ¦0,25                                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Буфер для ПЦР 10 X                  ¦5,00                                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦                                    ¦Концентрация в реакционной смеси    ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦MgCl2 раствор                       ¦5 ммоль/л                           ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймеры 4, 5 (10 мкМ)              ¦400 нмоль/л                         ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦dUTP                                ¦400 мкмоль/л                        ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Смесь нуклеотидов dATP, dCTP, dGTP  ¦200 мкмоль/л каждого                ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Праймер 6 (10 мкМ)                  ¦200 нмоль/л                         ¦
    +------------------------------------+------------------------------------+
    ¦Деионизированная вода               ¦довести до 25,00 мкл                ¦
    L------------------------------------+-------------------------------------

    - условия амплификации:

    -----------------------------------+--------------------------------------¬
    ¦              Стадия              ¦        Программа амплификации        ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Доамплификационный период         ¦2 мин./50 °C                          ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Денатурация первичная             ¦10 мин./95 °C                         ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Амплификация                      ¦                                      ¦
    ¦Денатурация                       ¦15 сек./95 °C                         ¦
    ¦Отжиг                             ¦60 сек./60 °C измерение               ¦
    +----------------------------------+--------------------------------------+
    ¦Количество циклов амплификации    ¦45                                    ¦
    L----------------------------------+---------------------------------------

    8.14. Метод количественного определения сахарной свеклы линии H7-1:

    - основан на ПЦР в реальном времени с определением гена, кодирующего синтез глютамин синтетазы (GS), присущей для всех линий сахарной свеклы и области ДНК, специфичной трансформационному событию H7-1, на границе генома сахарной свеклы и элемента генетической конструкции;

    - используются зонды, меченные красителем FAM;

    - для построения калибровочной прямой используются стандартные образцы состава генетически модифицированной сахарной свеклы: менее 0,1%, 0,5%, 0,9%, 2,0%, 5,0%;

    - праймеры на ген GS:

    1) 5' GAC CTC CAT ATT ACT GAA AGG AAG 3';

    2) 5' GAG TAA TTG CTC CAT CCT GTT CA 3';


    Страницы: | Стр.1 | Стр.2 | Стр.3 | Стр.4 | Стр.5 | Стр.6 | Стр.7 | Стр.8 | Стр.9 | Стр.10 | Стр.11 | Стр.12 | Стр.13 | Стр.14 | Стр.15 |


    Архив правовых актов
  • Реклама
 
  • Реклама
  • Счетчики

  • Рейтинг@Mail.ru
  • Новости